微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持。 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测。 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病<5、5~15、>15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR。 结论 ddPCR可以有效克服qPCR 灵敏度不足的难题,是对qPCR 的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断。     

湖南省实验动物病毒感染现况分析

目的对实验动物病毒感染状况进行抽样检测与评估。方法对湖南省相关生产及使用实验动物的机构进行大鼠、小鼠随机抽样,应用ELISA法进行大鼠汉坦病毒、大鼠仙台病毒、小鼠仙台病毒、小鼠鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒的抗体检测,应用Real-timePCR进行肠道病毒71、柯萨奇病毒A16及轮状病毒的核酸检测,设计特异性汉坦病毒M基因扩增引物,应用聚合酶链式反应(PCR)进行汉坦病毒核酸检测,对阳性产物进行基因序列测定,应用生物信息学方法,通过分子进化分析确定病毒的型别。结果 56份大鼠血清标本汉坦病毒及仙台病毒抗体检测为阴性;135份小鼠血清标本仙台病毒、鼠痘病毒、肝炎病毒的抗体检测结果均为阴性:189份大鼠小鼠血液标本肠道病毒71、柯萨奇病毒A16及轮状病毒的核酸检测均为阴性,1份SD大鼠血液标本汉坦病毒M基因PCR扩增结果为阳性,产物大小约860 bp,测序产物经BIAST序列比对,初步确定为汉坦病毒,进一步分子进化分析表明为汉坦病毒HTN型,与汉坦病毒疫苗株Z10株比较,核苷酸同源性为86%,氨基酸同源性为89%。结论湖南省实验动物存在汉坦病毒HTN型感染,应及时对实验动物进行免疫接种及从业人员健康体检。     

2015—2020年湖南省感染性腹泻病原学及分子流行病学特征分析

目的 了解湖南省感染性腹泻的病原谱,追踪其分子流行病学演变趋势,为感染性腹泻的综合防治提供科学依据。 方法 通过哨点监测结合暴发疫情监测的方法,收集2015—2020年湖南省感染性腹泻标本,对细菌病原采用细菌培养、生化鉴定进行检测;对病毒病原采用分子生物学方法进行分型鉴定,并对部分PCR阳性标本进行序列测定。 结果 哨点医院主动监测的总阳性率为35.61%,病毒检出率20.26%高于细菌检出率11.26%,混合病原感染检出率为4.09%。细菌病原谱以沙门菌O∶4群鼠伤寒型为主,病毒病原谱以轮状病毒A组G9P[8]型和诺如病毒GⅡ.4Sydney[P31]型感染为主。不同监测、不同年份的病原谱构成及其基因型变迁规律各不相同:哨点医院监测细菌阳性率低而病毒阳性率高时,诺如暴发疫情随之增加;暴发疫情中诺如病毒感染为86.78%,其中69.43%为GⅡ型感染,12.42%为GⅠ型感染,混合感染占3.03%。诺如病毒暴发疫情具有明显季节性,优势基因型为GⅡ.2[P16]占42.97%。 结论 2015—2020年湖南省感染性腹泻病毒类病原体高于细菌类,鼠伤寒沙门菌、A组轮状病毒G9P[8]和诺如病毒GⅡ.4 Sydney [P31]是最主要的病原体和优势血清/基因型;GⅡ.2 [P16]是诺如病毒暴发流行的优势基因型;通过连续哨点监测的数据支持,提前为暴发疫情做好了防控,促成了湖南省感染性腹泻发病率的平稳下降。     

2016—2018年湖南省含乳冷冻饮品生产加工过程肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌监测

目的 了解含乳冷冻饮品生产加工过程中肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)的分布,分析其污染的来源。方法 对湖南省4家含乳冷冻饮品生产企业生产加工过程各个环节的样品进行监测,采用国家标准检测方法对肠杆菌科和单增李斯特菌进行检验,利用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)技术对分离的单增李斯特菌进行分子分型。结果 2016—2018年4家企业共监测1 132份样品。2018年66份终产品样品中肠杆菌科定量检测有超标现象(计数结果>100 CFU/g的样品有3份),同时检出2株单增李斯特菌。非食品样品中肠杆菌科检出率最高是工具类样品(48.0%)(χ²=28.440,P＜0.001),单增李斯特菌检出率最高是环境类样品(18.7%)(χ²=41.193,P＜0.001)。分离的102株单增李斯特菌共有11种PFGE带型,其中有6组分离株分别具有同源性。终产品中单增李斯特菌的污染主要来自环境定植菌株。结论 该研究对掌握含乳冷冻饮品生产加工过程肠杆菌科和单增李斯特菌的污染分布及终产品中单增李斯特菌的可能污染源有重要意义,提示企业应加强生产监管,完善生产加工过程中的卫生控制措施,防止潜在风险以保障冷冻饮品终产品的食用安全。     

司他夫定、拉米夫定、奈韦拉平联合治疗AIDS效果

目的了解应用司他夫定（d4T）、拉米夫定（3TC）、奈韦拉平（NVP）方案治疗艾滋病患者的效果。方法42例艾滋病患者用d4T、3TC、NVP方案治疗1年,所有患者于治疗前和治疗后每月随访1次,并分别在治疗0个月、6个月及12个月检测病毒载量、CD4＋绝对计数和耐药情况。结果42例艾滋病患者治疗0个月、6个月、12月病毒载量平均值为5．00、2．54、2．03log10拷贝／ml,其中治疗6个月、12月后分别有24例、36例达到检测不到水平（〈50拷贝,1111）。CD4＋绝对计数治疗0个月、6个月、12月平均值分别为147、247、274个／mm^3。42例患者在治疗后发现有1例患者对ABC、AZT、d4T、DDI有潜在低度耐药突变。结论艾滋病人规范使用抗病毒治疗效果满意。     

细菌靶向治疗肿瘤的研究进展

近年来,针对肿瘤治疗的化学合成药物、天然提取药物、基因工程药物和靶向性药物得到了快速发展,但仍达不到治疗肿瘤的理想效果,探索治疗肿瘤新方法的研究越来越受到重视.自Coley[1]首次利用细菌治疗肿瘤以来,细菌靶向治疗肿瘤已成为近年国际研究的热点,并取得了突破性进展.     

463例疑似登革热病例实验室监测结果分析

目的 对463例疑似登革热病例开展血清学和病原学监测,了解NS1抗原、IgM/IgG抗体及病毒核酸在不同病程的产生规律。 方法 对疑似登革热病例血清应用胶体金免疫层析法(gold immunochromatographic assay, GICA)和荧光免疫层析法(fluorescence immunochromatography assay,FICA)检测NS1抗原,比较两种方法的特异性和敏感性。用GICA检测IgM和IgG抗体,分析不同病程抗体产生规律。用Real-time RT PCR检测病毒核酸,了解不同病程核酸检测阳性的时间分布。 结果 463例疑似登革热病例实验室确诊353例。353例病例在发病的0~3 d内以核酸的检出率最高,达97.08%(133/137);其次是NS1抗原,检出率为91.97%(126/137);在发病的8~14 d内NS1抗原和IgM抗体的检出率最高,检出率均为78.94%(45/57);病程≥15 d NS1抗原、IgM抗体、IgG抗体、核酸的检出率分别为58.06%(18/31)、61.29%(19/31)、54.84%(17/31)、87.10%(27/31);GICA与FICA检测NS1抗原的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为94.88%(278/293)、85.00%(51/60)、93.20%(329/353),kappa值为0.768,具有较好的一致性。 结论 登革病毒NS1抗原和核酸在感染早期具有较高的检出率和一致性;IgM/IgG抗体随病程延长检出率增高,在发病的第二周后检出率最高;GICA与FICA检测NS1抗原均适合基层早期诊断与筛查。     

湖南省1979-2010年狂犬病流行特征及其毒株遗传关系分析

目的分析1979-2010年湖南省狂犬病流行特征及分离病毒N基因特征,探讨疫情波动影响因素及病毒进化情况。方法采用回顾性与描述性流行病学方法对湖南省32年来,狂犬病疫情数据进行统计分析;利用PubMed-Entrez Search程序建立GenBank、EMBL报道的湖南省境内分离的狂犬病毒N基因序列本地数据库,应用生物信息学方法分析病毒N基因特征与变异情况,参考贵州与广西2个高发省份分离的部分狂犬病毒及国内疫苗株CTN-1-V N基因序列,运用Clustal W 1.83软件进行多重序列比对,运用MEGA 5.0.4软件构建N基因系统进化树,分析湖南省分离毒株与贵州、广西分离株亲缘关系及病毒遗传特征差异。结果 32年来,湖南省累计报告狂犬病病例12 576例,总发病率0.69/10万;全省124个县（市、区）均有疫情报告;病例集中于湘南与湘中地区;7～10月份发病数较多（43.23%）;农民所占比例最大（64.35%）。58株毒株N基因全序列平均GC含量为44.49%,AT含量为55.51%,平均单链分子量为409.7 KDa;氨基酸组成含量最高的为亮氨酸（Leu）,含量最低的为色氨酸（Trp）;58株毒株与贵州、广西及国内疫苗株有较近亲缘关系;58株病毒全部属于狂犬病毒基因I型。结论 32年来,湖南省狂犬病疫情存在较大波动;所分离的58株毒株遗传较稳定,未发生关键性变异。     

2009-2010年湖南省哨点医院婴幼儿病毒性腹泻病原学研究

目的了解湖南省哨点医院2009-2010年常见腹泻病毒的病原学特征,为病毒性腹泻的综合防治提供科学依据。方法收集湖南省哨点医院2009-2010年5岁以下住院腹泻患儿的粪便标本,采用Dako公司酶免疫试剂盒检测轮状病毒,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)进行分型鉴定;采用聚合酶链反应(PCR)检测腺病毒;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测星状病毒和杯状病毒,对部分PCR阳性标本进行测序加以验证。结果检测2009-2010年湖南省哨点医院婴幼儿腹泻标本759份,其中轮状病毒占22.79%(173/759)、杯状病毒占9.22%(70/759)、腺病毒占4.61%(35/759)、星状病毒占0.79%(6/759)、混合感染占2.50%(19/759)。173份轮状病毒G血清型与P基因型以G1、G3、P[4]型为优势株。四种病毒主要是感染2岁以下婴幼儿,且有明显的季节特征。测序结果证实12份阳性标本的PCR产物均为其所对应的病毒。结论轮状病毒是2009-2010年湖南省婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原,杯状病毒、腺病毒和星状病毒也是本省婴幼儿病毒性腹泻的重要病原。     

2017-2020年湖南省健康人群脊髓灰质炎病毒抗体水平监测结果分析

目的 调查湖南省健康人群脊髓灰质炎病毒(简称脊灰病毒)中和抗体水平,为预防和控制脊髓灰质炎提供科学依据。方法 对不同年龄段人群的脊灰病毒中和抗体采用微孔塑料板法进行检测。结果 脊灰病毒Ⅰ型、Ⅲ型抗体阳性检出率分别为98.10%和94.79%,几何平均滴度为1∶168.58和1∶77.05。脊灰病毒Ⅰ型和Ⅲ型抗体阳性检出率存在统计学差异,且其几何平均滴度值随着年龄的增加而降低,常德地区的血清抗体阳性检出率和几何平均滴度较其他地区低。在不同性别之间,脊灰病毒Ⅰ型、Ⅲ型抗体及Ⅰ型、Ⅲ型抗体之间的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 湖南省健康人群对脊髓灰质炎的免疫水平较高,已经建立起有效的免疫防护体系,加强常规免疫及坚持针对性的强化免疫,坚持高水平的免疫覆盖率是目前湖南省“无脊髓灰质炎病毒”状态的重要保障。